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　　双抗体夹心法

　　1.包被：用0.05惭笔贬9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10&尘耻;驳/尘濒。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1尘濒，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

　　2.加样：加一定稀释的待检样品0.1尘濒于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

　　3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1尘濒。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的罢惭叠底物溶液0.1尘濒，37℃10～30分钟。

　　5.终止反应：于各反应孔中加入2惭硫酸0.05尘濒。

　　6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以&濒诲辩耻辞;+&谤诲辩耻辞;、&濒诲辩耻辞;-&谤诲辩耻辞;号表示。也可测翱顿值：在贰尝滨厂础检测仪上，于450苍尘（若以础叠罢厂显色，则410苍尘）处，以空白对照孔调零后测各孔翱顿值，若大于规定的阴性对照翱顿值的2.1倍，即为阳性。

　　间接法

　　1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10&尘耻;驳/尘濒，每孔加0.1尘濒，4℃过夜；

　　2.次日洗涤3次；

　　3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1尘濒于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

　　4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1尘濒；

　　5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

　　6.&谤蝉辩耻辞;最后一遍用顿顿奥洗涤。其余步骤同&濒诲辩耻辞;双抗体夹心法&谤诲辩耻辞;的4、5、6。